大家好，我是小东，我来为大家解答以上问题。质粒构建的原理及方法，质粒很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

1、细菌质粒是独立于细菌染色体的自主复制的环状双链DNA分子，只有酵母的杀伤质粒(killerplasmid)已知是RNA分子。

2、环形双链DNA分子有三种构型。

3、第一种是共价闭合环状DNA(covalently close circular DNA，ccc DNA)，它的两条链都保持完整的环状结构，通常呈超螺旋构型。

4、第二种是开环DNA(open circularDNA，oc DNA)，它的双链中的一条保持完整的环状结构，另一条单链上有一到几个切口。

5、第三种是线状DNA，这种质粒的双链断裂呈线状。

6、这三种构型的同一种质粒在琼脂糖凝胶中电泳时，出现不同的迁移速率，走得最快的是超螺旋构型，其次是线性构型，最慢的是开环构型。

7、 细菌细胞中质粒的数目有很大差异。

8、多的每个细胞里可以达几十乃至几百份拷贝，少的则只有一到几份拷贝。

9、高拷贝数的质粒称为松弛型质粒(relaxed plasmid)，独立于细菌细胞而自主复制；低拷贝数的质粒一般是严紧型质粒(stringent plasmid)，它们的复制随细菌染色体的复制同步进行。

10、 实验证明，同一个大肠杆菌细胞里一般不会同时有两种不同的质粒，这是质粒不相容性(plasmid incompatibility)。

11、在细菌细胞增殖过程中，其中必有一种会被逐渐排斥。

12、这样的两种质粒被称为不相容质粒。

13、带有外源DNA的质粒载体转化到大肠杆菌细胞以后，会产生一系列生理效应，影响自身的稳定性。

14、特别是表达型的质粒载体，外源基因的表达会使宿主细胞的生长速率下降，以及质粒载体的丢失等。

15、这种质粒的不稳定性包括分离不稳定性(segregational instability)和结构不稳定性(structural instability)，前者指细菌细胞分裂过程中，有一个子细胞没有得到质粒拷贝，最终使质粒丢失的细胞成为优势群体；后者主要是指由于转座和重组，使质粒DNA重排或缺失。

16、 影响质粒载体稳定性的主要因素有： ①宿主细胞代谢负荷增加 质粒载体可使宿主细胞的代谢负荷加重，有的能延长其世代时间15％左右。

17、质粒载体的大小同宿主细胞生长延缓的程度呈正相关，这可能是由于质粒载体相对分子质量大，则对宿主细胞DNA复制的负荷更大的缘故。

18、同样，宿主细胞如维持质粒载体中外源基因的表达活性，势必在DNA转录和蛋白质翻译上承受更多的额外负担。

19、 ②细胞中所含质粒载体的拷贝数 细胞中所含质粒载体的拷贝数各不相同，也是影响质粒丢失的一个因素。

20、拷贝数差别不大时，质粒载体相对地稳定；拷贝数相差悬殊，则很容易造成一些细胞丢失质粒，并逐渐发展为优势群体。

21、 ③宿主细胞DNA重组系统的作用 质粒载体之间发生重组会形成二聚体、三聚体，甚至四聚体等所谓的质粒寡聚体(plasmid oligomer)，其稳定性比单体差。

22、此外，质粒载体中外源DNA片段的大小同质粒寡聚化的程度也密切相关。

本文到此讲解完毕了，希望对大家有帮助。